浓汁标本的细菌学检验 [形态检查在临床标本细菌学检验中的作用]

形态检查在临床标本细菌学检验中的作用

因此研究和发展病原生物学形态诊断技术对列举医学证据、完善医学诊断具有重 要意义。

【关键词】 临床标本,细菌学检验 自荷兰人列文虎克（anton van leeuwenhoek 1632-1725）创制了第一台 可放大250倍的简陋显微镜，发现许多肉眼不能发现的“活的小动物”以来，人类 对微生物有了初步认识，特别近几十年来，微生物学的研究迅速发展。涂片直接 观察是指将临床送来作细菌学检验的各类标本, 在进行革兰染色之前, 将标本涂 成薄片在生物显微镜的高倍镜下直接观察, 评价涂片出现的各种病理情况及各 种形态学特征, 可判断病原微生物的感染情况,进而结合化学染色技术对感染的 性质作出快速的初步判断。本文就各种临床标本的细菌学检验中涂片镜检的作用 展开讨论。

1 尿液标本检验 尿液标本的湿片直接镜检结果往往可以作为进一步检验的依据,根据涂 片镜检结果进一步安排培养计数和细菌鉴定和药敏试验。Www.133229.cOm一般 可将未离心的新鲜中段尿摇匀后滴片,用位相显微镜油镜检查。每份标本检查10 个视野，每视野中有一个细菌,相当于每毫升尿液中104～105个细菌［1］。每油 镜视野中发现10～1000个细菌,常可能有尿路感染,这时即可与临床联系进行初报 ［2］。卫生部2001年新颁发《医院感染诊断标准》中也提到“新鲜尿液经离心, 用相差显微镜检查(400×),在30个视野中有半数视野见到细菌者可协助诊断尿路 感染” 。如若每个油镜视野均未见细菌,取10μl尿液接种在血平板上以防漏检。若 每油镜视野中含菌0～9个,取10μl 尿液分别接种血液琼脂平板和中国蓝平板上培 养后计数。若每油镜视野含菌10个或以上,取尿液1μl涂平板计数，如尿液每油镜 视野中细菌达10个或以上,就可做直接药敏试验［3］。

2 痰液标本检验痰标本中存在有大量固有菌群,检验中若不能将真正的致病菌检出,必将 对诊断和治疗产生误导。涂片镜检可先进行标本合格性判定，一般每低倍视野扁 平上皮细胞小于10个,白细胞大于25个,细菌较纯,种数为1～2种即为合格标本。若 每视野中鳞状上皮细胞≥10个,且发现种类繁多的各种细菌则为口腔唾液，可判断 为标本不合格,若观察到一些或很多不含鳞状上皮细胞的视野,尤其是白细胞大量 聚集的地方,换用油镜检查,注意细菌形态及染色性,为1～2种或优势菌很可能为 病原菌。认请其细菌形态特点和染色性,在以后的培养物中要注意这类细菌菌落 的出现,这时就可做出初报(向临床报告标本的情况,有无炎症,主要的细菌,革兰染 色性等),必要时与临床医师联系了解病人情况。然后选用相应培养基如血液琼脂 平板,巧克力色血平板,中国蓝平板等,以四区划线作半定量分析。另外痰培养的结 果一定要和直接镜检的结果核对，培养出的优势菌和镜检优势菌应相符，若二者 不符,要首先考虑直接镜检所见［4］。

3 血培养标本检验 临床对血液标本一般不做直接涂片，但对血培养瓶中可疑有菌生长者或 自动分析仪血培养管中生长指数超标者, 发现细菌生长信号,应无菌抽取培养物 涂片进行革兰染色,查找细菌, 观察细菌形态及染色性初报细菌的大致类别,同时 用位相显微镜观察有无细菌形态 、动力等特点，根据显微镜检查的特征, 选择 合适的培养基转种增菌。对革兰染色未找到细菌的血培养瓶, 应补充吖啶橙染色 检查,发现阳性者进行分离鉴定,未发现阳性则应转种厌氧和需氧血平板,然后继 续培养监测至最终报告的时间。显微镜检查如果发现形态很均一的细菌,可根据 革兰染色结果选择抗菌药物进行直接药敏试验,同时转种培养,发现菌落,立即做 细菌鉴定和标准药敏试验。一般在早晨发现培养阳性以后,马上做药敏试验,到下 午4～5点时一般可出初步结果,向临床初报,为临床提供快速的信息，以后按常规 的检验程序进行。

4 脓汁标本检验 脓汁标本的显微镜检查必检项目，每份脓汁标本需进行革兰染色和美兰 染色,以显微镜油镜观察细菌的种类、染色性和脓细胞形态。如果多形核白细胞 占80～90%以上者可判定为急性炎症,淋巴细胞较多者(30%)为慢性炎症。细菌的 形态在原始标本的涂片中常比在培养物中的更典型。在观察细菌时要注意单一或 混杂细菌,有无可疑厌氧菌等。如见着色浅而不均的革兰阴性杆菌常为厌氧菌，提示需作厌氧菌培养。

5 脑脊液标本检验 脑脊液涂片显微镜镜检是脑脊液检验的重要项目，对疾病临床诊断及起 始治疗起重要作用。临床微生物实验室接到脑脊液标本以后，应该立即进行显微 镜镜检,所见结果必须立即向医师报告。假如脑脊液呈脓性混浊的,可以不经过离 心，如为浆液性，需要离心沉淀以后取沉渣作涂片显微镜镜检，样材作三张涂片 显微镜镜检。一作革兰染色,观察细菌形态和染色性,一作美兰染色,观察脓细胞种 类也观察细菌,一张备用作抗酸性染色检查结核杆菌［5］。初步报告结果以后按 常规的检验程序进行操作。

6 粪便涂片检验 粪便标本一般不做直接涂片显微镜镜检, 但对怀疑有霍乱弧菌、葡萄球 菌、弯曲菌、难辨芽胞梭菌和真菌感染者, 需进行直接涂片［1］。另外粪便推 片革兰染色检查观察正常菌群的种类、数量和比例等可辅助诊断肠道菌群失调症。

若涂片显微镜镜检观察到大片葡萄球菌聚集,说明有葡萄球菌结肠炎,培养时应增 用血液琼脂平板,看到大量产芽胞革兰阳性大杆菌可能为难辨梭菌，结合临床表 现可以诊断抗生素相关性腹泻和假膜性肠炎,分离时可增用ccfa选择性培基作厌 氧培养。腹泻粪便中常见脓细胞，用位相显微镜直接检查有时可见动力很强的弯 曲菌［1］。

总之，现代临床细菌学检验一方面要依靠高科技逐步建立检验自动化, 另一方面要改进工作模式进行快速诊断,标本直接涂片检验在细菌学鉴定中非常 重要,其结果结合革兰染色检查, 可对标本的性质可以作出快速的初步判断。如涂 片直接观察还可快速检出真菌(包括念珠菌、隐球菌及其他酵母样真菌),并增加真 菌的培养检查, 有意识将培养时间延长, 以避免漏检。涂片镜检可明确革兰染色 性，是细菌鉴定的前提,若革兰染色有误，细菌的其他鉴定肯定也有误,即使自动 化仪器也是如此。同时涂片镜检的结果可修正仪器报告出现的错误,避免误报。

涂片镜检能将标本中达到一定数量的死活菌均可检出,对培养有重要的补充作用。

另外涂片镜检有时还会获得意外信息。如发现非白细胞有核细胞提示存在癌细胞 的可能,可提示临床做肿瘤细胞的检查。直接涂片观察还有利于发现活动的原虫 和其他寄生虫等。所以实验室工作人员应应主动加强涂片镜检工作,以提高检验质量。