大B弥漫淋巴瘤【弥漫性大B细胞淋巴瘤bcl2、bcl6、CD10蛋白表达】

弥漫性大B细胞淋巴瘤bcl2、bcl6、CD10蛋白表达

方法 应用免疫组织化学sp法， 检测60例弥漫性大b细胞淋巴瘤标本中bcl  2、bcl  6、cd10蛋白的表达水平。

结 果 bcl  2、bcl  6、cd10在60例弥漫性大b细胞淋巴瘤中的表达率分别为 55.0%(33/60)、48.3%（29/60）、46.7%（28/60），其中cd10（+）/bcl  6（+） 15 例，25%；
cd10（+）/bcl  6（-）13例，21.7%；

cd10（-）/bcl  6（+）14例， 23.3%；
cd10（-）/bcl  6（-）18例，30%。cd10（+）/bcl  6（+）与cd10（-） /bcl  6（-）中 bcl  2的表达差异具有统计学意义。结论 bcl  2有望成为dlbcl 亚分类的指标。

【关键词】 bcl  2；
bcl  6；
cd10；
弥漫性大b细胞淋巴瘤 ；
免疫组织化 学 expression of bcl  2，bcl  6，cd10 protein and their significance in subgroups of diffuse large b  cell lymphoma chen yu1, zhao tong2,cai qing  fa3, wu bing  xu1,chen mei  yan1 1.department of pathology, the 95th military hospital, putian 351100,china;2.department of pathology,nanfang medical university;3. department of pathology,affiliated hospital of putian universityabstract：objective to investigate the expression of bcl  2，bcl  6，cd10 protein and their significance in subgroups of diffuse large b  cell lymphoma. methods immunohistochemistry technique (sp method) was used to assess the expression levels of bcl  2，bcl  6，cd10 protein in 60 cases of diffuse large b  cell lymphoma. results expression of bcl  2，bcl  6 and cd10 protein was found in 33/60(55.0%)，29/60(48.3%)，28/60(46.7%) cases, respectively. the cd10/bcl  6 patterns were as follows: cd10（+）/bcl  6（+） 15 cases， 25%；
cd10（+）/bcl  6（-）13 cases，21.7%；

cd10（-）/bcl  6（+）14 cases， 23.3%；
cd10（-）/bcl  6（-）18 cases，30%。wWw.133229.cOMexpression levels of the bcl  2 protein in cd10（+）/bcl  6（+） pattern was higher than that in cd10 （-）/bcl  6（-）pattern (p=0.037).conclusion the bcl  2 protein may be of value to distinct subgroups of diffuse large b  cell lymphoma. key words：bcl  2；
bcl  6；
cd10；
diffuse large b  cell lymphoma；

immunohistochemistry弥漫性大b细胞淋巴瘤（diffuse large b  cell lymphoma，dlbcl）是成人最 常见的、高度恶性的非霍奇金淋巴瘤（non  hodgkin"s lymphomas，nhl），约占 成人nhl的40%[1  3]，尽管who将其列为一种独立的疾病类型，但它实际上是一 类异质性的淋巴瘤，应用传统的chop（环磷酰胺、阿霉素、长春新碱、泼尼松） 方案治疗发现仅有一半左右的患者可获得缓解[2]，另一半患者要么治疗无效， 要么治疗缓解后复发，最后都导致死亡。对于这一部分的患者，寻找有效的指标 来指导治疗是非常重要的。近年来国外一些学者[4  8]研究发现利用生发中心标 志物表达的差异可对dlbcl进行亚分类，另一些学者[9  12]发现细胞凋亡调控基 因在dlbcl分类中也具有重要作用。我们应用免疫组织化学方法检测cd10、bcl  6、 bcl  2在dlbcl中的表达，并对其表达情况及临床意义进行探讨。

1 材料与方法 1.1 材料 收集本院、莆田学院附属第一医院病理科2003年1月～2006年12月诊断明 确病例资料齐全的dlbcl 60例，所有病例均为中性福尔马林固定,常规石蜡切片， he染色。由两位以上从事淋巴瘤研究的专家重新阅读，按照2001年who关于淋巴 造血系统肿瘤分类标准重新分类。

1.2 方法 采用石蜡切片链霉素抗生物素蛋白  过氧化物酶连接法（sp）免疫组织化 学染色，进行生发中心标志物（cd10、bcl  6）、凋亡抑制基因bcl  2的检测， 所用抗体来源、克隆号、工作浓度见表1。免疫组化试剂盒购自福州迈新生物技 术有限公司。抗原修复液为ph9.0的乙二胺四乙酸（edta），cd20用0.01mol/l的枸 橼酸缓冲液（ph6.0）。用pbs代替一抗作阴性对照，以扁桃体组织作阳性对照。

dab显色，苏木素衬染。cd10/bcl  6作为生发中心样分类的依据。

1.3 结果判定 阳性结果判断标准：
cd20、cd10 阳性定位于细胞膜， bcl  6阳性定位于 细胞核，bcl  2阳性主要位于细胞质，以＞20%的肿瘤细胞染色判为阳性。

1.4 统计学方法 采用spss10.0统计分析软件进行χ2检验，p0.05有差异有统计学意义。表1 抗体名称、来源及工作浓度 tab 1 immunohistochemical study: antibodies and conditions of use antibodyclonesoursedilutioncd20l26maxim1∶20bcl  2100/d5maxim1∶ 1bcl  6p1f6neo  marker1∶1cd1056c6zymed1∶1 2 结果 2.1 临床及病理结果 60例dlbcl患者，年龄16～91岁，平均年龄52.9岁。男29例，女31例，男女 比例为0.94∶1。累及淋巴结27例（45.0%），单纯累及结外33例（55.0%），主 要见于胃肠道、中枢神经系统、颌下腺、睾丸等。参照2001年who关于淋巴造血 系统肿瘤分类标准，组织学变型主要是中心母细胞性，占86.7%，见表2。表2 60 例dlbcl组织学变型 2.2 蛋白的表达 60例dlbcl中，cd20全部阳性， cd10阳性率46.7% (28/60)， bcl  6阳性率 48.3% (29/60)，bcl  2阳性率55.0% (33/60)。bcl  6/cd10模式为：cd10（+）/bcl  6 （+） 15例，25%；
cd10（+）/bcl  6（-）13例，21.7%；

cd10（-）/bcl  6（+） 14例，23.3%；
cd10（-）/bcl  6（-）18例，30%。

2.3 cd10/bcl  6与bcl  2表达的相关性 cd10（+）/bcl  6（+）15例中，bcl  2（+）3例，阳性率20.0%；
cd10（-） /bcl  6（-）18例中，bcl  2（+）10例，阳性率55.6%。两者的表达差异具有统 计学意义（χ2=4.332,p0.05）。cd10（+）28例中，10例表达bcl  2，阳性率57.1%；

cd10（-）32例中，17例表达bcl  2，阳性率53.1%；

两者bcl  2表达差异无统计 学意义（χ2=0.097,p0.05）。bcl  6（+）27例中，9例表达bcl  2，阳性率33.3%；

bcl  6（-）33例中，25例表达bcl  2，阳性率75.8%；
两者bcl  2的表达差异有统 计学意义（χ2=10.884,p0.05）。

3 讨论 dlbcl是高度侵袭性、异质性的淋巴瘤，在临床表现、形态学特点、免疫表型和遗传学特征等方面都存在明显差异，但若早期诊断、强力化疗，近半数的患 者可获得缓解。以往人们常用国际预后指数（ipi）数值的大小判断预后，但临床 应用证明大多数dlbcl的ipi数值为中间值[13，14]，难以判断预后。2000年以来国 外采用cdna微阵列技术[4  7] 研究发现在基因水平上可以将dlbcl分为三种类 型：（1）生发中心样（germinal center b  cell  like ，gcb）：基因表达特征与 正常生发中心b细胞相似；
（2）活化b细胞样(activated b  cell  like，abc)：基因 表达特征与活化的外周血b细胞相似；
（3）第3型（type 3）。并且发现gcb的预 后明显好于abc和type 3，故将dlbcl简单分为两型：gcb与non  gcb ，前者代表预 后较好的一型，后者则代表预后较差的一型。但cdna微阵列技术要求新鲜或冰冻 标本以提取足够的rna, 所使用芯片的价格比较昂贵，临床上难以推广应用。近年 来人们把研究的方向转向蛋白水平的表达上，并发现表达cd10、bcl  6的患者预 后较好。

cd10，急性淋巴母细胞性白血病共同抗原，为膜相关的中性肽链内切酶；

在淋巴细胞的分化过程中，它表达于前b细胞和生发中心b细胞，大约75%的前b 淋巴母细胞性白血病及大部分滤泡性淋巴瘤均表达cd10，在基因分析中发现cd10 的表达与t(14∶18) 染色体异位有关，因此可以作为生发中心细胞的标志物[15]。

本组cd10的阳性率为46.7%（28/60），高于国外的报道[11，16]，可能与本组病 例大部分为中心母细胞性有关。

bcl  6，锌指蛋白，为一核内转录因子，属于可调节细胞的增殖、分化及 器官的发育、形成的锌指蛋白家族。bcl  6基因首先在伴有染色体2q27转位的 dlbcl中发现，在成熟b细胞的生发中心内表达，但却未见于不成熟的前体细胞或 分化好的浆细胞，它在b细胞的分化和生发中心形成中起重要作用。bcl  6基因 具有控制炎细胞浸润、淋巴因子表达及生发中心形成的生理作用，可作为一转录 因子抑制生发中心b淋巴细胞进一步分化成熟而导致nhl的发生[17]，也可作为生 发中心细胞的标志物。研究表明cd10和bcl  6联合应用能够确定dlbcl的gcb型，是 预后好的有效指标[4  6，15]。本组bcl  6阳性率为48.3%（29/60），与文献报 道相近。60例dlbcl中，cd10（+）/bcl  6（+） 15例(25%)，低于bai m(32%)的报 道[18]。cd10（-）/bcl  6（-）18例(30%)，与bai m(31%)的报道相近[18]。但cd10 （+）/bcl  6（-）或cd10（-）/bcl  6（+）的病例占38%，对于这一部分的患者， 其预后的判断指标仍需进一步探讨。

大量研究表明细胞凋亡受众多基因调控，bcl  2基因是细胞凋亡的重要调 节基因，它首先在人体内的b淋巴细胞中发现，是一原癌基因，能抑制细胞凋亡。它们在线粒体参与的凋亡途径中起调控作用，能控制线粒体中细胞色素c等凋亡 因子的释放。文献[8,13,19]报道bcl  2高表达在dlbcl中较为常见（30%～60%）， 其中20%～30%病例因bcl  2基因易位，即t(14;18)导致bcl  2高表达，其余病例 因bcl  2基因扩增而使bcl  2过表达。在dlbcl中，bcl  2高表达的患者预后明显 差[4，14，20]，并与化疗耐药有关[19]。本组bcl  2阳性率为55.7%(33/60)，与国 外大部分研究结果相近[8,13]。其中cd10（+）/bcl  6（+）15例中，bcl  2阳性 率为20%，bcl  6（-）/cd10（-）18例中，bcl  2阳性率为55.6%，两者表达差异 具有统计学意义，说明表达生发中心标志物的病例bcl  2低表达，而生发中心标 志物不表达的病例bcl  2高表达，提示bcl  6/cd10与bcl  2联合应用可能成为 dlbcl亚分类的指标。

本组cd10（+）与cd10（-）的病例，bcl-2表达的差异无统计学意义，但bcl  6 （+）与 bcl  6（-）的病例bcl  2表达的差异具有统计学意义，是否提示bcl  6 （-）的病例可根据bcl  2的表达判断预后，bcl  6与bcl  2的表达是否有一定的 相关性，有待进一步研究。