【简便有效分离培养大鼠主动脉内皮细胞的一种新方法】主动脉细胞

简便有效分离培养大鼠主动脉内皮细胞的一种新方法

【关键词】 主动脉·体外培养·内皮细胞·大鼠 A new method for isolation and culture of the endothelial cells of the rat aorta 【ABSTRACT】Objective:To investigate a modified method of isolating and culturing the endothelial cells from the rat aorta for endothelial bioresearch. Methods:Turned inside out, the aorta of the rat, of which the intima tunica was exposed, was ligated at both ends and cultured in a 50 mL culture bottle. Results:A small amount of cells migrated out from the aorta 6 to 8 days after cultured;
the migrating cells spread over most of the culture surface of the bottle 12 to 14 days after cultured, 80% of them in a confluent monolayer. The confluent cells were identified as endothelial cells with the typical cobblestone appearance and the positive reaction for factor Ⅷ relative antigen, no other types of cells was observed. Conclusion:This is a woundless, nonenzymatic method of obtaining highly purified primary endothelial cells of the rat aorta, especially practical for isolation and culture of small vascular endothelial cells. 内皮细胞是研究心血管、炎症、肿瘤等疾病最常用的工具。目前，对脐静脉 等较大血管原代内皮细胞的分离与培养1般采用酶消化法，技术已经成熟。但对 于大鼠等小动物血管而言，由于管径细小，操作难度大，其内皮细胞的分离与培 养1直存在产量少、易混入杂细胞等问题 ［1］。本研究经过反复实验，建立了1 种有效获取高纯度、高数量大鼠原代血管内皮细胞的分离与培养方法。

1 材料与方法 1.2 培养方法 1.2.２ 细胞传代培养 原代培养约12 ～14 d， 迁出生长的细胞覆盖培养瓶面积的2/3以上，约80 %的细胞汇合即可传代。取出 主动脉，用D-Hanks液冲洗培养瓶2次，常规消化、吹打，1 000 r/min离心5 min， 弃上清，加入含10% 胎牛血清的DMEM/F12培养液适量，制成细胞悬液，依照 细胞的量按1：1或1：2传代培养，3 d换液1次。另9只大鼠以同样步骤重复上述实验。

1.4 细胞纯度分析 取6次培养的第2代主动脉内皮细胞，vWF免疫细胞化 学染色后，每张盖玻片400倍镜下随机选5个视野计数细胞，计算细胞阳性表达率 （细胞阳性表达率=阳性细胞数/细胞总数）。

2 结果 2.2 免疫细胞化学染色 vWF免疫细胞化学染色，细胞质呈现棕黄色 阳性反应。每张盖玻片100倍镜下随机选10个视野进行观察，均未见染色阴性表 达细胞（图2）。

2.3 细胞纯度分析 vWF免疫细胞化学染色后，每张盖玻片400倍镜下随机选 5个视野计数细胞，所见细胞均为阳性染色细胞，阳性表达率为100%，即获取的 内皮细胞纯度为100%。

重复实验10次，均获得同样结果。

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