苗种培育是金鱼繁育中的关键环节,金鱼苗种体质弱,对外 界环境抵抗力差,往往由于水质不佳或者敌害生物的存在而 导致其大批量死亡。强氯精、二氧化氯是水产养殖中常用的 消毒剂,可以杀灭水体中的各种病原微生物,戊二醛和亚甲 基蓝是防治水霉病和杀灭一些小型寄生虫的常用药物,高锰 酸钾常用于防治细菌性疾病和杀灭一些寄生虫,氯氰菊酯是 一种高效的杀虫剂[6]。本试验以体长1.4~1.6cm的金鱼稚鱼为研究对象,选择以上6种常用水产药物进行急 性毒性试验,旨在为金鱼及相关观赏鱼苗种培育阶段的疾病 防治和安全用药提供参考。
1材料和方法 1.1供试鱼 供试金鱼取自新乡市郊区某金鱼养殖场,为同批次繁殖、 同池饲养的稚鱼,体长1.4~1.6cm,试验前将金鱼苗 暂养在水族箱中,适应性驯养1周。挑选规格一致,反应灵 敏,无病无伤的鱼苗进行试验。
1.2供试药物 二氧化氯(有效质量分数8%,粉剂,北京华龙星宇科 技发展有限公司)、水产用戊二醛(有效质量分数20%, 液体,黄石农人药业有限公司)、氯氰菊酯(有效质量分数 4.5%,乳剂,湖北潜江市渔药厂)、高锰酸钾(分析纯, 北京化学试剂三厂)、亚甲基蓝(化学纯,山东滕州银丰化 工有限公司)、强氯精(有效氯含量50%,粉剂,江苏武 进养康生物科技有限公司)。试验前预先用蒸馏水将试验药 物配制成一定质量浓度的母液,再根据需要稀释成合适的质 量浓度。
1.3试验条件 所有试验均在实验室内进行,使用常温静水试验法[7], 试验用水为经过曝气24h以上的自来水,pH值为7.1 ±0.1,试验期间水温为(24±2)℃,试验容器为30cm×40cm×20cm的塑料水族箱,为防止试验期 间材料鱼跳出,箱上加盖网布,试验期间不投饵。
1.4试验方法 首先根据鱼病防治的药物常用剂量,适当扩大或减小药 物质量浓度进行预备试验,观察鱼苗反应及存活情况,根据 预备试验的结果,在使金鱼苗全部存活(死亡率为0)的最 高质量浓度和全部致死(死亡率为100%)的最低质量浓 度之间,按等对数间距设计5个质量浓度,同时设1个空白 对照组,每个质量浓度组设3个平行。各种药物设置的质量 浓度梯度详见表1。分别将试验药物的母液按比例稀释成所 需质量浓度,将供试鱼按照从低到高的质量浓度逐个放入, 每组对应的容器内各随机放入鱼苗20尾。试验开始后,先 做8h连续观察,观察其反应和中毒症状,然后分别记录2 4h、48h和96h时在不同质量浓度药物胁迫下供试鱼 的死亡数量。判断死亡的标准是用镊子夹供试鱼的尾部,如 无反应,即认为鱼已经死亡,及时捞出死鱼。为保证试验药 物的有效质量浓度,每隔24h更换1次药液。试验结束后, 根据试验数据,计算出不同时间药物对金鱼苗的半致死质量 浓度和安全质量浓度。
1.5半致死浓度和安全浓度的计算 根据不同时间段供试鱼的死亡率,用直线内插法[7] 求出24h、48h和96h的LC50。SC按照以下公 式计算:SC=LC50(48h)×0.3/(LC50(24h)/LC50(48h))2。
2结果与分析 6种水产药物对金鱼苗的急性毒性试验结果详见表1。
不同药物作用后金鱼苗表现出不同的急性毒性效应。
2.1强氯精对金鱼苗的急性毒性作用 强氯精高质量浓度组供试鱼的急性中毒症状主要表现 为焦躁不安,在水底侧游,或在水中垂直游动,药液质量浓 度越大,鱼游动越剧烈,身体逐渐失衡,反应迟钝,最后呆 滞于水底死亡。死亡鱼的体表和鳃部黏液较多,鳃丝淤血且 边缘发白。4.0mg/L时,供试鱼24h死亡率10 0%;
2.8mg/L时,供试鱼24h死亡率为90%, 48h死亡率达100%;
低质量浓度组的供试鱼没有表现 出明显的中毒反应,2.0mg/L时,供试鱼24h死亡 率为30%,96h死亡率为50%;
1.4mg/L时供 试鱼在24h时死亡率为10%,96h死亡率达到3 0%;
在1.0mg/L强氯精作用下,72h后供试鱼开 始出现死亡情况,96h死亡率为10%;
强氯精对金鱼稚 鱼的24h、48h和96h的LC50分别为2.3mg /L,2.1mg/L和2.0mg/L,SC为0.53m g/L。
2.2二氧化氯对金鱼苗的急性毒性作用 二氧化氯处理组在3.2mg/L和3.8mg/L时, 金鱼苗没有异常反应,40h后出现死亡,48h死亡率为10%,96h死亡率分别为20%和30%;
4.5mg /L时,供试鱼24h死亡率10%,96h死亡率达到4 0%;
高质量浓度二氧化氯处理下供试鱼快速游动,身体失 衡,死亡前游动缓慢,呼吸困难,死后鳃盖和口张开。5. 4mg/L时,供试鱼24h死亡率达30%,96h达到 100%;
而在6.4mg/L的高质量浓度处理下,供试 鱼24h死亡率达到80%,48h达到100%。二氧化 氯对金鱼稚鱼的24h、48h和96h的LC50分别是 5.8mg/L,5.4mg/L和4.7mg/L,SC为 1.4mg/L。
2.3戊二醛对金鱼苗的急性毒性作用 戊二醛作用于金鱼稚鱼后,在2.3mg/L和2.7m g/L的低质量浓度处理组,20h后鱼苗开始出现死亡情 况,24h死亡率为10%,至96h时死亡率分别达到2 0%和30%;
中高质量浓度的戊二醛处理下,急性中毒现 象表现为往水面窜动,浮头,体色变暗,高质量浓度组的供 试鱼眼睛发白,整个眼眶突出。戊二醛质量浓度为3.2m g/L时,鱼苗15h开始出现死亡情况,24h死亡率为 20%,96h死亡率达到60%,质量浓度为3.7mg /L时,6h开始出现死亡情况,24h死亡率为70%, 48h死亡率达100%;
在4.3mg/L的高质量浓度 作用下,金鱼苗4h开始死亡,24h内100%死亡;
戊 二醛对金鱼稚鱼的24h、48h和96h的LC50分别为3.5mg/L,3.3mg/L和3.0mg/L,SC 为0.88mg/L。
2.4高锰酸钾对金鱼苗的急性毒性作用 高锰酸钾质量浓度为1mg/L时,36h后金鱼苗开 始出现死亡,48h死亡率为10%,96h死亡率为2 0%,死亡金鱼体色发黄,鳍条上附有红棕色污物;
1.4 mg/L时,15h开始出现死亡,24h死亡率为10%, 96h死亡率达80%;
质量浓度在2.0mg/L时,2 4h的死亡率为40%,48h死亡率为80%,96h死 亡率为100%;
在高质量浓度高锰酸钾作用下,金鱼苗即 刻表现出明显的中毒症状:反映迟缓,鳃变为黄色,呼吸频 率加快,体色变黑。质量浓度为2.8mg/L时,金鱼苗 8h后开始死亡,24h死亡率为60%,48h死亡率为 100%;
在4mg/L的高锰酸钾溶液中,金鱼苗3h出 现死亡,24h死亡率为100%。高锰酸钾对金鱼稚鱼的 24h、48h和96h的LC50分别为2.4mg/L, 1.7mg/L和1.2mg/L,SC为0.26mg/L。
2.5亚甲基蓝对金鱼苗的急性毒性作用 在高浓度亚甲基蓝作用下,金鱼苗身体失衡,游动缓慢, 呼吸困难,逐渐沉至水底,金鱼死亡后体色变深,各鳍条和 鳃的颜色变为蓝色。药物质量浓度为15mg/L时,20 h后开始出现死亡,24h死亡率达到20%,96h死亡 率为50%;
质量浓度为17.8mg/L时,24h死亡率为30%,96h死亡率为90%;
质量浓度为21.2 mg/L和25.2mg/L时,24h死亡率均为40%, 分别在96h和48h死亡率达到100%;
而在30mg /L的亚甲基蓝处理下,供试鱼10h开始出现死亡,24 h死亡率为70%;
48h死亡率为100%。亚甲基蓝对 金鱼稚鱼的24h、48h和96h的LC50分别为26. 8mg/L,17.8mg/L和15.0mg/L,SC为 2.36mg/L。2.6氯氰菊酯对金鱼苗的急性毒性作用 金鱼苗在0.024mg/L氯氰菊酯处理下即刻出现中毒 症状,鱼体失去平衡,窜游、旋游,之后呼吸逐渐减弱至死 亡,沉至水底,鱼体中毒后体色变淡,身体向一侧弯曲,眼 球突出、眼底有出血点,鳍条颜色无变化,供试鱼在2h后 开始死亡,24h死亡率为100%。在0.0098mg /L和0.0154mg/L的氯氰菊酯处理下,金鱼苗出 现的中毒症状稍弱于0.024mg/L组,8~10h后 出现死亡,24h死亡率为50%~70%,96h死亡率 为100%;
0.004mg/L组的金鱼苗24h后出现 死亡,48h死亡率为30%,96h死亡率为40%;
而 在0.0062mg/L氯氰菊酯处理下,金鱼苗18h后 开始出现死亡,24h死亡率为10%,96h死亡率达到 50%,氯氰菊酯对金鱼稚鱼的24h、48h和96h的 LC50分别为0.0098mg/L,0.0094mg/ L和0.0062mg/L,SC为0.002mg/L。3讨论 强氯精又称三氯异氰尿酸(trichloroiso cyanuricacid,TCCA),在水产养殖中作 为一种高效的消毒杀菌剂而普遍用于水体消毒,杀菌力为漂 白粉的100倍左右[6]。TCCA对无鳞鱼类和有鳞鱼 类的苗种有较强的急性毒性,将云斑�t置于4mg/L的 强氯精溶液中,8h死亡率达100%,SC为0.38m g/L[1],对剑尾鱼的SC为0.22mg/L[2], 对南方大口鲶的SC是0.147mg/L[6]。本试验 结果表明,强氯精对金鱼稚鱼24h的LC50为2.3m g/L,96h的LC50为2.0mg/L,SC为0.5 3mg/L。而生产上养殖水体中强氯精使用一般是0.1 ~0.5mg/L全池泼洒,用于防治细菌性疾病[6]。
因此,从安全角度考虑,在金鱼苗种培育阶段应当慎用或禁 用强氯精。
二氧化氯是一种高效低毒的广谱杀菌消毒剂,可杀死细 菌芽胞、病毒、原虫和藻类等[6],其消毒作用不受水质、 pH值、氨氮以及有机物浓度的影响,是一种绿色消毒剂。
二氧化氯对鲇的SC为15.1mg/L[9]。对鳜鱼苗 的SC为0.37mg/L[10],本试验中,二氧化氯 对金鱼苗的SC为1.4mg/L。生产上二氧化氯的全池 泼洒使用质量浓度为0.1~0.2mg/L[6],因此在 金鱼苗种培育中可以使用二氧化氯作为疾病防治的全池泼洒药物。但二氧化氯的杀菌能力随温度的降低而减弱。在使 用过程中应引起注意。戊二醛为无色油状液体,其碱性水溶 液具有较好的杀菌作用,可杀灭细菌、真菌、病毒,当pH 值为7.5~8.5时,杀菌作用最强,其作用效果较甲醛强 2~10倍,生产上用于水产养殖环境及养殖工具的消毒 [6]。试验结果表明,戊二醛对金鱼苗的24hLC50 为3.5mg/L,SC为0.88mg/L。高于水产用戊 二醛的推荐使用剂量0.04mg/L,因此戊二醛可以在 金鱼苗种培育过程的疾病防治中使用。高锰酸钾是一种强氧 化剂,其水溶液与有机物接触,能释放出新生态氧,迅速氧 化有机物,从而起到杀菌、杀虫的作用,常用于防治鱼虾等 细菌、真菌和寄生虫类疾病及设施、工具的消毒[6]。生 产上高锰酸钾对一般养殖鱼类常用剂量为遍洒1~2mg /L和10~20mg/L浸浴20~30min。高锰酸 钾在水中容易产生二氧化锰沉淀,对鱼的鳃组织有较强的损 坏作用,高锰酸钾在质量浓度很高的情况下还能氧化鱼体本 身,因此鱼类对高锰酸钾非常敏感。据报道,高锰酸钾对泥 鳅的SC为0.75mg/L[11],对白斑狗鱼幼鱼的 SC为1.37mg/L[12],对南方大口鲶的SC为 0.59mg/L[8]。对鲇鱼苗的SC是0.82mg/ L[9],本试验中,高锰酸钾对金鱼苗的24hLC50 为2.4mg/L,SC为0.26mg/L,远低于生产中 常规使用剂量,因此,建议除了对养殖设施和工具的消毒外,在金鱼苗种培育过程中禁用高锰酸钾。
亚甲基兰是一种氧化剂,通过氧化和还原反应起到杀菌 和杀虫的作用。在水产养殖中用于防治水霉病、烂尾病、红 嘴病,杀灭小瓜虫和三代虫,以及亚硝酸盐或氰化物中毒的 解毒等[6]。生产上常以0.5~1.0mg/L水体全池 遍洒或10mg/L水体浸浴10~20min防治鱼类 水霉病。亚甲基蓝有助于增加鱼类的呼吸机能,药性温和, 对鱼毒性较低,试验中对金鱼苗的24hLC50为26. 8mg/L,SC为2.36mg/L,高于生产上常规全 池泼洒的使用剂量,因此,可以作为金鱼和其他观赏鱼的疾 病防治药物使用。
氯氰菊酯为拟除虫菊酯类杀虫剂,具有触杀和胃毒作用。
杀虫广谱,药效迅速,水产养殖中用于杀灭水体中鱼类的敌 害剑水蚤和水生昆虫的幼虫如水蜈蚣等,还用于预防和治疗 鱼类的中华蚤、锚头蚤、鱼鲺等寄生虫疾病[6]。不同鱼 类对氯氰菊酯的敏感性不同,不同发育阶段的鱼对毒物的敏 感性也存在着一定的差异,但氯氰菊酯对不同的鱼类均表现 出较强的毒性作用,其毒性机制是影响神经膜上的Na+通 道,阻断神经传导,影响扰乱机体离子代谢,中毒达到一定 程度后,金鱼出现抽搐,运动失调直至死亡。氯氰菊酯对白 斑狗鱼幼鱼的SC是0.008mg/L[12],对蓝点 笛鲷鱼苗的SC是0.0028mg/L[3],本试验中, 氯氰菊酯对金鱼苗的24hLC50为0.0098mg/L,SC为0.0026mg/L。鉴于其毒性较强,极低 剂量就能致鱼类死亡,因此,在使用过程中一定要注意操作 方法,控制使用剂量,建议在苗种放养之前使用氯氰菊酯杀 虫除害,而在观赏鱼苗种培育中应慎用或禁用氯氰菊酯进行 全池泼洒。
同一药物对不同的鱼类表现出不同的毒性作用,SC值 有一定的差异,可能与受体生物对药物的耐受性不同有关, 还与供试鱼类的年龄、体长大小以及试验环境条件等有关。
一般无鳞鱼类较有鳞鱼类对药物更敏感,与药物对体表直接 渗透吸收有关,而对于不同发育阶段的鱼而言,鱼苗阶段的 个体新陈代谢快,其吸收毒物的速率也快,因此,在鱼苗培 养阶段对药物的选择使用上要慎重。目前水产养殖中滥用药 物的现象非常严重,导致病原生物产生抗药性以及水体微生 态环境的破坏,诱发更严重的病害发生。谨慎用药应成为一 条重要原则,应选择毒性小、对水体污染小的药物,同时兼 顾价格便宜和使用方便等特点。就该试验所涉及的6种水产 药物而言,二氧化氯、戊二醛和亚甲基蓝等具有较强的杀菌 作用,对金鱼稚鱼的安全性相对较高,是金鱼苗种培育过程 中优先选择的药物。
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