HPLC,法测定消渴丸中格列本脲的含量 消渴丸和格列本脲

HPLC 法测定消渴丸中格列本脲的含量

1 仪器与试药 Angilent—110型高校液相色谱仪(美国Angilent公司)，UV—2500型可 见—紫外分光光度计(日本岛津公司)，消渴丸(市售品 批号H00390 H00214)，甲 醇(色谱纯)，格列本脲对照品(中国药品生物制品签定所，批号0135—0103)，其 余试剂均为分析纯。

2 方法与结果 2.1 色谱条件 DiamondC18色谱柱(4.5mm×150mm,5μg);柱温：30℃;流动相：甲醇— 磷酸二氢氨溶液(磷酸二氢铵1.725g，容于300mL水，磷酸调pH3.5±0.5(65:35);流 速：1.0mL /min;检测波长：274nm;进样量：5μL。

2.2 对照品溶液的制备 精密称取格列本脲对照品10mg，置50mL量瓶中，加甲醇20mL超声处 理使溶解，加甲醇至刻度，摇匀。精密量取10mL置50mL量瓶中，加流动相至刻 度，摇匀，即可。浓度40μg/mL。

2.3 供试品溶液的制备 以10丸为1份，共称10份，算出每份的平均重量(10丸的重量)取本品 研成细粉，取10丸(约相当于格列本脲2.5mg)，精密称定，置具塞烧瓶中，精密 加入甲醇50mL，称定重量，超声处理30min，再称定重量，用甲醇补足减失的重 量，摇匀，过滤，取续滤液，取得。

2.4 阴性对照溶液的制备按处方比例及制备方法，自制格列本脲的阴性样品，按2.3项下的方 法制备硬性对照溶液。

按以上色谱条件得到对照品，消渴丸及阴性对照的色谱图，表明样品 与对照的保留的时间相同，阴性对照溶液。

按以上色谱条件得到对照品，消渴 丸及阴性对照色谱图，表明样品与对照品的保留时间相同，阴性对照无干扰。

2.5 线性关系 精密吸取格列本脲40μg•mL-1对照品溶液2、4、6、8、10μL按上述色 谱条件测定峰面积，以峰面积A为纵坐标，进样量(μg)为横坐标，绘制标准曲线， 得回归方程为Y=156.45X—0.4313，r=0.9999。格列本脲在0.08～0.40μg范围内呈 线性关系。

2.6 精密度实验 精密吸取格列本脲对照品溶液(40μg/mL)10μL，重复进样6次，测定格 列本脲峰面积为62.573，RSD=0.30%(n=6)。

2.7 重复性实验 取同批共试品(批号H00390)5份，照“样品测定”项下操作，测定格列 本脲含量，RSD=0.92%(n=5)。

2.8 稳定性实验 取对照品溶液，在实验室中室温放置，分别在0、5、10、15、20、24h 进样，对照品的峰面积RSD=0.92%(n=5),溶液在在24h内稳定。

2.9 回收率实验 精密称取已知含量的消渴丸(批号H00390，含量1.9mg/mL)细粉(约相 当于格列本脲1.25mg)9份，分为3组，每组分别精密加入对照品溶液(浓度为 1.0mg/mL)1.0mL、1.25mL、1.5mL照“样品测定”项以下操作，计算加样回收率平 均回收率97.19%，RSD1.85%。见表1。表1 回收率试验结果(略) 2.10 样品的测定取3批消渴丸，按“供试品溶液”项下制备溶液，同法操作，即得。见 表2。表2 样品的含量测定结果(略)