【经性传播途径高暴露HIV1持续血清阴性者淋巴细】职业暴露传播途径

经性传播途径高暴露HIV1持续血清阴性者淋巴细

【关键词】 hiv  1;
hiv血清阴性;
t淋巴细胞亚群 study on the expression and activation of t lymphocyte subsets in highly exposed hiv  1 but persistently seronegative individuals by sexual transmission wang yue  yun1,2, wang xiao  hui3, cheng jin  quan3, peng ji4, chen lin3, shi xiang  dong3, nie shao  fa1. 1.department of epidemiology and statistics, school of public health, tongji medical college, huazhong university of science and technology, wuhan 430030, china;
2.medical college of yangtze university, jingzhou 434000, china;
3.shenzhen center for disease control and prevention, shenzhen 518020, china;
4.shenzhen municipal chronic disease hospital, shenzhen 518020, china 【abstract】 objective to understand the distribution and immune activation status of t lymphocyte subsets in highly exposed hiv  1 and persistently seronegative (heps) individuals, and explore the immunologic mechanism of non  susceptibility to hiv  1 by sexual transmission in heps individuals. methods fresh peripheral venous blood was collected from 37 heps, 65 hiv  1  infected individuals and 128 healthy controls. four colors flow cytometry was used to detect the distribution of t lymphocyte subsets and expression of hla  dr, cd38 on cd4+ t cells. results cd4+ counts, cd4/cd8 ratio were higher in heps individuals and healthy controls than those in hiv  1  infected individuals (p0.001), but cd8+ counts were significantly lower in the two groups than those in hiv  1  infected individuals (p0.001);
percentages of cd38+/cd4+, hla  dr+ cd38+/cd4+ were significantly lower in heps and healthy controls than those in hiv  1  infected individuals (p0.001). meanwhile, the percentage of hla  dr+ cd38+/cd4+ in heps individuals was lower than that in healthy controls (p0.05). the percentage of hla  dr+/cd4+ in heps individuals was significantly lower than that in hiv  1  infected individuals and healthy controls (p0.001). conclusions the expression of activation antigen marker hla  dr on cd4+ t cells is at a low level, which probably is correlated with non  susceptibility to hiv  1 in heps individuals by sexual transmission.【key words】 hiv  1;
hiv seronegativity;
t  lymphocyte subsets 我国新发现hiv感染人数呈现明显上升趋势，近几年艾滋病疫情每年 以30%左右的幅度增长，阻止艾滋病在我国蔓延的形势十分严峻。

WwW.lw881.com传染病预防最有效的措施是对人群接种疫苗，但艾滋病疫苗研 发虽然投入巨大，短期似乎看不到很大希望，其中一个重要原因就是对hiv对人 体免疫系统相互作用的规律等问题缺乏真正意义上的了解[1]。近年来，由于艾 滋病疫情控制效果远未达到预期目标，艾滋病疫苗研究亦未取得明显进展，一些 学者开始将注意力集中到两类特殊人群，一类人群是较高频率暴露于hiv但未感 染，hiv抗体呈阴性反应，该类人群被称为hiv暴露后未感染者(hiv  exposed seronegative subjects，esns or es人群)[2]或hiv高暴露持续血清阴性者(highly exposed and persistently seronegative, heps人群)[3];另一类人群为感染hiv后长期不 进展者(long  term no  progressors,ltnp)。目前，对hiv不易感性的影响因素和机 理尚不明确，国内外对heps人群不易感hiv的研究并不多见。

经性接触传播是目前全球主要的hiv  1感染传播途径。全球大约70% ～80%感染者是通过性接触感染上hiv  1,其中异性间性接触传播占70%以上，而 男性同性恋性接触传播占5%～10%。近年来，随着我国hiv感染人群由高危人群 向普通人群传播的流行趋势的出现，性接触传播hiv起了较重要的影响作用。

人免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,hiv)主要侵犯在免疫 调节中起重要作用的cd4+ t淋巴细胞，引起其数量减少和功能缺陷，使机体免疫 功能低下，导致各种机会感染和肿瘤的发生，最后引发获得性免疫缺陷综合征 (aids，艾滋病)[4，5]。

cd8+ t细胞是特异性细胞免疫的效应细胞，通过分泌各种细胞因子， 杀死被病毒感染的靶细胞，它是机体抗hiv最主要的免疫细胞，随着hiv病毒量的 增加，cd8+ t细胞增加，cd4+ t细胞减少，引起cd4/cd8比例倒置。

人类主要组织相容性复合物(major histocompatibility complex，mhc) 分布在人体所有核细胞的表面，但由于该抗原首先在白细胞表面被发现，故被称 为人类白细胞抗原(human leucocyte antigen，hla)，hla  dr是hla  ii类分子的重要 抗原之一。正常情况下，hla  dr仅分布于b细胞、活化的t细胞、巨噬细胞、树突 状细胞和精子等[6]。hla  dr在免疫应答中的主要作用是与t细胞表面的cd4分子和 /或抗原结合，促进抗原传递，hla  dr表达是t细胞活化的标志[7]。人的cd38分子是分子量为45kd的单链跨膜糖蛋白，胞外决定簇(羧基 端)为功能区，是一种多功能酶，在细胞的信号转导中起作用，其细胞外功能区 上点突变可抑制信号转导。在成人，cd38蛋白主要表达于大多数的nk细胞、t细 胞、b细胞和单核巨噬细胞。cd38分子通过对激活信号的转导，促进t细胞激活， 因而，cd38分子可作为细胞活化的标志[8]。

hiv感染者免疫系统活化使得淋巴细胞表面标志活化的抗原表达发生 改变，其中hla  dr的上调即为淋巴细胞活化的主要标志之一[9～11]。hiv  1感染 导致淋巴细胞活化使外周血t淋巴细胞表面活化标志物hla  dr、cd38等表达发生 改变。其中hla  dr的增高与t细胞功能缺失相关，且随疾病进展呈线性增高[12]。

cd4+ t细胞作为hiv感染的主要靶细胞，其活化性增加为hiv  1的复制创造了有利 的环境[9]。

本文将选择性传播途径heps人群作为研究对象，选择经性传播途径 hiv+人群及无任何高危行为暴露的hc人群作为对照，了解经性传播途径heps人群 淋巴细胞亚群表达及其免疫活化状态，探讨经性传播途径高暴露hiv不易感的免 疫基础，对识别hiv  1感染的高危人群，保护易感者，以及艾滋病的预防控制、 临床治疗和疫苗研究等具有重要的理论和现实意义。

1 材料和方法 1.1 研究对象 本文选择的37例经性传播途径高暴露hiv  1持续血清 阴性者来自于hiv  1阳性感染者的配偶或固定性伴，在没有采取安全套保护措施 发生性行为达半年以上，每周性行为频率约2～3次及以上，且最后一次无保护性 性接触12周后，hiv抗体检测持续阴性，其中男性20例，女性17例，平均年龄 (33.1±7.4)岁;
hiv  1阳性感染者65例，系经性传播途径感染hiv  1，其中男性35 例，女性30例，平均年龄(31.6±5.6)岁;128例健康对照人群无任何hiv  1高危行为 暴露史，并排除hiv、hbv、hcv及梅毒感染，其中男性69例，女性59例，平均年 龄(30.9±6.2)岁;该三类人群在性别和年龄构成方面差异无统计学意义，组间均衡 性较好。三类人群来自于深圳市疾病预防控制中心2006年1月～2007年12月的艾 滋病自愿咨询检测人群和常规健康体检人群，均填写知情同意书。

1.2 主要设备及试剂 主要实验设备及试剂均购自becton dickinson公 司,包括流式细胞仪(facs  calibur);edta抗凝管;鞘液(coulter sheath liquid);cd4绝对 计数管;溶血素及下列各种抗体:cd4/cd8/cd3抗体,fitc标记的抗cd4、抗cd8,pe标记的 抗cd38单抗及percp标记的抗cd3、apc标记的抗hla  dr单抗。1.3 方法 cd4/cd8/cd3绝对值计数，依据1997年美国疾病预防控制中 心关于hiv感染者cd4+ t细胞检测指导方法[4]：采用微量全血直接双标记免疫荧光 染色，edta(k3)抗凝管收集外周静脉血。加相应的荧光标记抗体各20 μl于50 μl全 血中,室温避光孵育15 min。加入红细胞裂解液450 μl,震荡混匀后室温避光孵育15 min直接上机观察，应用bd公司multiset软件检测自动分析。

cd38+/cd4+、hla  dr+cd38+/cd4+细胞百分比分析：染色、溶血步骤 同上，溶血孵育15 min后，800 r/min离心5 min,去上清，加入鞘液2 ml振荡、混匀， 800 r/min离心5 min后去上清。加入鞘液500 μl后上机检测。以cd3  percp、侧向 散射光(ssc)确定t淋巴细胞群，以cd4  apc区分出cd4+ t淋巴细胞和cd8+ t淋巴细胞。

再以cd38+  pe、hla  dr+  apc进行分析。应用bd公司cellquest软件对进行检测与 分析。

1.4 统计学处理 cd3、cd4、cd8绝对数直接以均数±标准差表示;cd4/cd8 比值、cd38+/cd4+、hla  dr+cd38+/cd4+等百分比经平方根反正弦变换后以均数± 标准差表示,三组人群间均数比较采用方差分析，p0.05为有统计学意义，所有统 计处理采用spss 13.0专业统计软件完成。

2 结果 2.1 不同人群组外周血t淋巴细胞亚群表达的比较 heps人群cd3绝对 值计数与hiv+人群和hc人群差异无统计学意义，但hiv+人群cd3绝对值计数低于hc 人群;heps人群和hc人群的cd4、cd4/cd8比值均高于hiv+人群，见表1。表1 不同人 群组间外周血t淋巴细胞亚群的数量或比值的比较 2.2 不同人群组cd38+/cd4+、hla  dr+/cd4+、hla  dr+ cd38+/cd4+细胞 百分比(%)比较 heps人群和hc人群的cd38+/cd4+百分比低于hiv+人群，但heps人 群和hc人群的cd38+/cd4+百分比差异无统计学意义;heps人群的hla  dr+/cd4+百 分比低于hiv+人群和hc人群;heps人群和hc人群的hla  dr+ cd38+/cd4+百分比低于 hiv+人群，同时heps人群的hla  dr+ cd38+/cd4+百分比低于hc人群，见表2。表2 不 同人群组cd38+/cd4+、hla  dr+/cd4+、hla  dr+cd38+/cd4+细胞百分比(%) 3 讨论 本研究结果显示，heps人群和hc人群的cd4+ t细胞、cd4+/cd8+比值均 高于hiv+人群(p0.001)，cd8+ t细胞低于hiv+人群(p0.001);heps人群和hc人群的cd4+ t细胞、cd8+ t细胞和cd4/cd8比值差异无统计学意义，说明heps人群与hc人群 比较，在淋巴细胞亚群表达方面并无特别之处。

heps人群和hc人群的cd38+/cd4+、hla  dr+/cd4+、hla  dr+ cd38+/cd4+ 百分比均低于hiv+人群，机体感染hiv  1后，cd4+ t细胞的活化性增加，与有关 报道一致[9，10]。heps人群的hla  dr+/cd4+及hla  dr+ cd38+/cd4+百分比除了低 于hiv+人群外，还低于hc人群,这也许意味着heps人群经性传播途径高暴露hiv  1 持续血清阴性，是和其hla  dr+/cd4+、hla  dr+ cd38+/cd4+的表达处于显著性低 水平状态有着密切的联系，进而对hiv  1呈现不易感状态。关于heps人群 hla  dr+/cd4+、hla  dr+ cd38+/cd4+的表达处于显著性低水平状态的原因目前尚 不清楚,将有待今后进一步深入研究。

综上所述，本研究中经性传播途径高暴露hiv  1持续血清阴性者，即 heps人群对hiv  1的不易感性可能与其t淋巴细胞表面标志活化抗原表达水平处 于较稳定的低水平状态有关。