细胞免疫的生物学效应 [卵圆细胞的生物学特征及其与肝癌发生的关系]

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卵圆细胞的生物学特征及其与肝癌发生的关系

卵圆细胞的生物学特征及其与肝癌发生的关系【关键词】原发性肝癌卵圆细胞物学特征肝癌发生卵圆细胞最初是在1944年由opie等[1]在大鼠化学诱癌的过程中发现的。

1956年，farber[2]首次将其命名为卵圆细胞。关于肝癌的发生，主要有两种不同的学说：一种认为肝癌是由分化成熟的肝细胞去分化而成，这是关于肝癌发生的比较经典的理论[3]；
另一种学说认为肝癌是由肝内的干细胞——卵圆细胞异常分化所致；
其代表人物sell s等[4]根据卵圆细胞的形态、表型特征、癌基因表达等大量间接证据，认为肝细胞癌来源于卵圆细胞。由于卵圆细胞是一个异质性的细胞群，对其生物学特性还没有一个公认的结论，这样就导致分离、提纯卵圆细胞还缺乏一个公认的标准。卵圆细胞的可能来源、卵圆细胞与肝癌发生之间的关系等依然是学术界争论的问题。正是基于以上存在的问题，我们设计了本实验，试图通过动态的方法观察卵圆细胞的生物学特征及其可能的来源，并为肝癌发生的干细胞异常分化学说提供一个实验依据。

1 材料与方法 1.1 动物模型的构建及标本处理选取的sd雄性大鼠和标准饲料由中山大学北校区实验动物中心提供，诱癌饲料由标准饲料加入0.06％3′  甲基  4  二甲氨基偶氮苯（3′  methyl  4  dimethylaminoazobenzene, 3′  me  dab）(东京化成工业株式会社)制成。Www.133229.CoM29只sd大鼠分为2个实验组：诱癌组大鼠24只，喂饲诱癌饲料和正常饮水；
对照组大鼠5只则喂饲标准饲料和正常饮水。各组大鼠分别在诱癌后第4、8、14、17和24周处死（诱癌组第4周时处死4只，其后分4次各处死5只；
对照组每次处死1只），取肝组织经4％甲醛固定，石蜡包埋并连续切片备用。

1.2 常规he染色和免疫组化(immunohistochemistry,ihc) he染色按照实验室常规方法进行。

1.2.1 免疫组化所选用的一抗、试剂盒及操作方法。

ov  6单抗，由美国stewart sell教授惠赠。抗体稀释度为1∶50，用edta高压修复，所用二步法试剂盒及dab显色剂均购自福州迈新公司。afp（克隆号a0008）和c  kit（克隆号a4502）均购自dako公司，前者抗体稀释度为1∶100，用柠檬酸热修复；
后者抗体稀释度为1∶50，用edta高压修复；
所用sp法试剂盒及dab显色剂均购自福州迈新公司。上述3种免疫组化均按照说明书进行操作。

1.2.2 免疫组化对照组的选择每组切片均设立阴性空白对照、阳性对照、阴性对照。阴性空白对照片用 pbs代替一抗，其余方法步骤一样；
阳性对照片是已知的肯定有表达的切片；
阴性对照片是肯定没有表达的切片。

1.3 特殊染色

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