血清镁【反向Calmagite-EDTA比色法测定血清镁】

反向Calmagite-EDTA比色法测定血清镁

1 原理 在碱性条件下，Calmagite与镁生成红色复合物，加入EDTA后镁与其 生成EDTA-Mg络合物，使Calmagite游离，吸光度值降低，其降低值与镁离子浓 度成正比，而克服了本底因素的影响。

2 材料与方法 2.1 试剂 上海Trace试剂盒(Trace公司Calmagite镁测定试剂盒)，包 括：
2.1.1 Calmagite试剂：含Calmagite 0.14 mmol/L，KCl 77 mmol/L， PVP 0.03 mmol/L。

2.1.2 碱性缓冲液：KCN 1.5 mmol/L，KOH 14.3 mmol/L。

2.1.3 应用液：临用前Calmagite液与碱性缓冲液等量混合即可。

2.1.4 20 mmol/L EDTANa2溶液。

2.2 仪器 751G分光光度计。

2.3 方法 测定管(U)、标准管(S)及空白管(B)中依次加血清、1.5 mmol/L镁标准液及蒸馏水各30 μl，加应用液3.0 ml，混匀，540 nm波长比色，B 管调零，记录各管吸光度值(A)。各管加20 mmol/L EDTANa2溶液10 μl，混匀， B管调零，按上比色，记录吸光度值(A2)。计算：Mg mmol/L=(UA1-UA2)/(SA1-SA2)×1.5 2.4 原法按试剂说明书进行。

3 结果与讨论 3.1 EDTANa2浓度选择 空白管中加入5 mmol/L EDTANa2溶液5μl后吸光度值轻微降低，可能系试剂中含有微量镁的缘故。1.5 mmol/L镁标准液 加入10 mmol/L EDTANa210 μl后吸光度值不再降低，至100 mmol/L时仍无变化， 故本文选用20 mmol/L EDTANa2溶液已能满足需要。

3.2 稳定性 镁与Calmagite的络合反应瞬间完成，吸光度值至少60 min内无变化。加入EDTANa2后其络合物立即分解，吸光度值迅速降低至本底值， 60 min内无变化，其结果满意。

3.3 精密度 取2份不同浓度的血清，平行测定镁浓度10次，批内CV 值分别为1=0.87 mmol/L，s1=0.028，CV1=3.22%及2=0.92 mmol/L，s2=0.039， CV2=4.24%。批间1=0.872 mmol/L，s1=0.043，CV1=4.93%及2=0.918 mmol/L， CV2=5.33%。

3.4 回收率 于镁浓度为0.92 mmol/L的混合血清中分别加入浓度分 别为0.2，0.6及0.8 mmol/L的镁标准，测得回收值依次为0.195，0.602及0.825 mmol/L，回收率分别为97.5%，100.3%及103.1%。

3.5 方法学比较 用反向法及原法同时测定10份外观正常血清，其 结果分别为反向法=0.884 mmol/L及原法=0.897 mmol/L，P0.05。10份TG浓度在 3.4～23 mmol/L的血清标本：(±s)反向法=0.817±0.21 mmol/L，原法=1.32±0.47， P0.05。脂血中镁浓度原法明显高于本法。10份脂血标本用乙醚去脂后再测，其 结果为(±s)原法=0.823±0.29 mmol/L，与反向法比较P0.05。脂血所致的结果增高， 是由于样本本底干扰所致。

综上所述，用反向法测定血清镁浓度方法简便、快速、可有效地排除 本底对吸光度的干扰，适用于脂血、母乳、奶制品、尿液等样本镁离子浓度测定， 日常工作中对不适应直接比色法的标本最好用该法求得准确结果。