谈黄连水提液中盐酸小檗碱含量检测方法的建立_黄连盐酸小檗碱含量

谈黄连水提液中盐酸小檗碱含量检测方法的建立

1 材料与方法 1.1 仪器 高压液相色谱仪(沃特世有限公司);超纯水(上海力新仪器有限公司);针筒 式微孔滤膜过滤器(天津市科亿隆实验设备有限公司);盐酸小檗碱(批号：E-0295， 购自上海同田生物技术股份有限公司);黄连(购自北京同仁堂);乙腈、甲醇(色谱纯， 天津市光复精细化工研究所)。

1.2 方法 1.2.1 色谱条件博纳艾杰尔色谱柱(5 m，150 mm4.6 mm);流动相为乙腈 -0.03 mol/L 磷酸二氢钾(30∶70);流速为1.0 mL/min;检测波长为277 nm;柱温为 25 ℃。

1.2.2 对照品溶液的制备精密称取盐酸小檗碱2.5 mg，置于25 mL 容量瓶 中，用甲醇溶解并定容至刻度，混匀，得到对照品贮存液(100 g/mL)。分别吸取 盐酸小檗碱对照品贮存液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mL，置于5 mL 容量瓶中， 用甲醇定容至刻度，混匀，分别得到10、20、30、40、50、60 g/mL 的对照品工 作溶液。1.2.3 黄连水提液的制备称取黄连0.1 g，加入蒸馏水100 mL，加热回流 1.0 h，放冷，过滤，得到黄连水提样品溶液。

1.2.4 阴性样品溶液的制备吸取甲醇2 mL，过滤，得到阴性样品溶液。

2 结果2.1 方法学考察 2.1.1 专属性试验精密吸取阴性样品溶液、盐酸小檗碱对照品溶液和黄连 水提样品溶液各10 L，自动进样注入高压液相色谱仪中，结果在盐酸小檗碱对照 品色谱峰相应的位置上，黄连水提样品溶液具有相同保留时间的色谱峰，而在阴 性样品中未出现相应的色谱峰。

2.1.2 线性关系考察分别精密吸取浓度为10、20、30、40、50、60 g/mL 的 盐酸小檗碱对照品溶液10 L，自动进样注入高压液相色谱仪，对色谱图进行处理 后计算出峰面积，以盐酸小檗碱浓度(g/mL)为横坐标、峰面积值为纵坐标，计算 回归方程为y=32 112x-2 634.3，R2=0.999 81。结果表明，在10-60 g/mL 范围内， 峰面积与盐酸小檗碱浓度呈良好的线性关系。

2.1.3 精密度试验连续取盐酸小檗碱对照品溶液6 次，每次10 L 进样，结 果峰面积的相对标准偏差(RSD)为0.51%，说明仪器精密度良好。

2.1.4 重复性试验取同一批黄连水提液10 L，连续6 次，注入高压液相色 谱仪，结果6 份样品峰面积RSD 为0.84%，表示方法重复性良好。

2.1.5 溶液稳定性试验分别于0、1、6、12、18 和24 h，取同一批黄连水 提液样品10 L 进样，测定峰面积，结果显示，24 h 内峰面积RSD 为0.83%，表 明样品溶液在24 h内稳定。

2.1.6 加样回收率试验取10 mL 盐酸小檗碱对照品贮存液，置25 mL 容量 瓶中，加甲醇至刻度，混匀，制成浓度为40 g/mL 的盐酸小檗碱对照品溶液。分 别量取40 g/mL对照品溶液6 份，每份2.5 mL，置5 mL 容量瓶中。再分别吸取已 知盐酸小檗碱含量的黄连水提液2.5 mL，置对照品容量瓶中，用甲醇定容，至刻 度，混匀。分别进样10 L注入高压液相色谱仪，计算加样回收率。结果6 份水提 液样品平均回收率为98.15%，RSD 为1.87%，表明回收率良好。

2.2 样品含量测定 取10 L 黄连水提液，注入高压液相色谱仪，按照2.1的色谱条件进行检测， 通过外标一点法计算黄连水提液中盐酸小檗碱的含量，结果样品中盐酸小檗碱含 量为40.45 g/mL。3 小结 本试验采用高效液相色谱-紫外检测法检测了黄连水提液中盐酸小檗碱的 含量，方法学考察证明该试验中使用的方法良好，可以作为黄连水提液中盐酸小 檗碱含量测定的方法。