白细胞介素2的受体 [白细胞介素15及其受体在儿童急性白血病中的表达]

白细胞介素15及其受体在儿童急性白血病中的表达

【关键词】 急性白血病；
白细胞介素15；
受体；
基因 levels of interleukin  15 and its receptor subunit expression in children acute leukemia ye zhong  lv1, chen ming  zhen1, chen ri  ling1,huang xiu  lan1,pang wei  jun2, chen shui  wen3 1.department of pediatrics, affiliated hospital of guangdong medical college,zhanjiang 524001,china;2.department of laboratory；
3.maternal and child health hospital, bao  an district, shen zhen corresponding author：chen ming  zhen, e  mail: chenminzhen @tom.comabstract：objective to investigate the expression of il  15 and its receptor in children acute leukemia, contribute to understand their function on acute leukemia. methods every group of acute lymphocytic leukemia(all),acute myeloid leukemia (anll) or non  leukemia group had 20 children who did not receive any treatment. the expression of the interleukin  15 receptor alpha,beta,gamma mrna in bone marrow were examined by rt  pcr, and make an semiquantitative analysis. the level of il  15 in serum of every group by means of elisa.results the level of il  15 in al（all and anll）group， were significant was assayed in statistics（p0.05）with healthy children and non  leukemia group .the difference which the il  15 level of all compared with anll or the level of healthy children compared with non  leukemia group is neglected in statistics（p0.05）.the expression of il  15r alpha，beta，gamma mrna in al is significantly different than that of healthy and non  leukemia children.the difference which the il  15 alpha，beta，gamma of all compared with anll or the level of healthy children compared with non  leukemia group is neglectable in statistics （p0.05）. conclusion the il  15 level of al children is lower than control group.and the expression that of il  15rα,β,γ subunit in bone marrow mononuclear cell of al issmaller than those of non  leukemia group. key words：acute leukemia;
interleukin  15;
receptor；
gene 免疫因素在白血病的发生发展中起着重要的作用，尤其是细胞免疫功能的 变化，可能与白血病的发生密切相关；
白细胞介素15(il  15)是一种可溶性的淋 巴细胞生长因子。WwW.133229.coM我们既往的研究发现，一定浓度的il  15对 骨髓增生异常综合征(mds) cd34＋造血细胞有刺激增殖分化和抑制凋亡的效果， 其机制可能是与il  15上调bcl  2、bcl  xl凋亡抑制基因和caspase  3的表达有关 [1  4]。最近，我们通过检测部分白血病患儿及其健康儿童的血清il  15水平及 其受体表达情况，探讨它们在儿童急性白血病中的表达及作用，现报告如下。

1 资料和方法 1.1 临床资料 所有标本分别来自本院新确诊的病例和健康体检的儿童，均未经过任何细 胞因子、激素或化学药物的治疗。分组：急性白血病组患儿40例，年龄4～16岁， 其中男26例，女14例；
包括急性淋巴细胞白血病(all)患儿20例，男12例、女8例；

急性非淋巴细胞白血病(anll)患儿20例，男14例、女6例；
诊断标准按张之南主编 《血液病诊断及疗效标准》第二版[5]。非白血病组患儿20例，男13例，女7例， 年龄在2～13岁，其中缺铁性贫血患儿10例、巨幼细胞性贫血患儿4例、葡萄糖  6  磷酸脱氢酶 (g  6  pd) 缺乏症缺乏患儿3例和地中海贫血的患儿3例。正 常儿童对照组20例，年龄在4～10岁之间，其中男10例，女10例。

1.2 方法 1.2.1 标本采集 抽取不同组别对象的外周血5ml，用离心机2 000g/min，离心5min，吸取 血清转移到另一管，-20℃保存待测。同时抽取骨髓5～10ml，置含肝素的抗凝管 中，充分混匀，即时分离单个核细胞，操作过程注意无菌。

1.2.2 il  15测定 分离好的血清在常温下解冻20min，从4℃冰箱取出il  15 elisa试剂盒在室 温下放置20min，平衡至室温。其余的操作按试剂盒说明进行。1.2.3 pbmc分离、总rna的提取、目的基因rt  pcr扩增 （1）引物设计与合成 il  15受体α、β、γ亚基基因的mrna从genbank中找出，引物根据primer软 件设计，由上海生工生物工程技术服务合成。引物序列为：β  actin：(528bp)上 游5′  ctacaatgagctgcgtgtgg  3′，下游5′  aaggaaggctggaagagtgc  3′；
il  15rα：
(203bp)上游5′  cacctatg aaa ctcggggaaac  3′，下游 5′  atgggaatgcggag aa cc  3′，il  15rβ：(236bp)上游5′  gtgcgatggagggtgatg  3′，下游5′  cattcctgcttctgcttgag  3′，il  15rγ: (428bp) 上游5′  cattggaagccgtggttatc  3′,下游 5′  ggtgagtatgagacgcaggtg  3′。

（2）rt  pcr 按qiagen公司的rt  pcr一步法试剂盒说明书操作。其具体步骤为：先加入 标本和试剂（冰上进行），然后于pcr仪上进行扩增，参数及条件如下：50℃ 30min, 反应条件为94℃，预变性15min，34个循环：94℃变性45 s；
50℃～68℃退火30 s；

72℃延伸45 s；
最后72℃延伸10min，总反应体积为25μl。其中α亚基的退火温度 为53℃，β亚基的退火温度为53℃，γ亚基的退火温度为54℃，β  actin的退火温 度为55℃。α亚基的循环次数为31次，β亚基的循环次数为35次，γ亚基的循环次 数为35次，β  actin的循环次数为31次。

1.2.4 电泳和图像分析 取目的基因产物和内参产物混匀，于2%琼脂糖凝胶电泳，紫外透射仪观 察结果，并拍照图片，图片经扫描仪扫描后，用sigmascan 5.0图像分析软件进行 光密度积分值分析，分别计算出检测基因与β  actin (内参)的光密度值之比，作 为其相对含量值。

1.3 统计学方法 计量资料用±s表示，使用spss11.５统计软件进行统计分析，多个样本均数 的比较采用单因素方差分析，两两比较采用q检验。

2 结果 2.1 白细胞介素15的水平不同组别血清中白细胞介素15的水平检测，急性淋巴细胞白血病组的 il  15浓度为（34.37±2.8）pg/ml，急性非淋巴细胞白血病组的浓度为（29.61±3.2） pg/ml，正常对照组的浓度为（122.23±4.2）pg/ml，非白血病组的浓度为 （117.54±3.9）pg/ml；
其中all、anll组il  15的浓度分别和正常对照组的浓度进行 比较，p均0.05，差异有统计学意义。all、anll组il  15的浓度分别和非白血病组 的浓度进行比较，p均0.05，差异有统计学意义。all和anll组比较、正常对照组和 非白血病组比较，p均0.05，差异无统计学意义，见表1。表1 不同组别外周血清 中il  15浓度 2.2 不同组别的骨髓单个核细胞的il  15受体α亚基基因表达 il  15受体α亚基条带在非白血病组最清晰，all组、anll组、非白血病组的 表达率分别是75％、75％、100％，α亚基表达的病例中灰度扫描结果比值分别为 0.4618±0.1460、0.4952±0.1271、0.8964±0.2130。all组、anll组灰度扫描结果的比 值分别和非白血病组的比值进行比较，p均0.05，有显著性差异。而且all组灰度 扫描结果的比值与anll组的比值进行比较，p0.05，差异无统计学意义，见图1。

2.3 不同组别的骨髓单个核细胞的il  15受体β亚基基因表达 il  15受体β亚基条带在非白血病组最清晰，all组、anll组、非白血病组的 表达率分别是80％、85％、100％，β亚基表达的病例中灰度扫描结果比值分别为 0.5391±0.1740、0.5514±0.1961、0.8846±0.1310。all组、anll组的灰度扫描结果比 值分别和非白血病组的比值进行比较，p均0 .05，差异有统计学意义。而且all组 灰度扫描结果的比值与anll组的比值进行比较，p0.05，差异无统计学意义，见图 2。

2.4 不同组别的骨髓单个核细胞的il  15受体γ亚基基因表达 il  15受体γ亚基条带在非白血病组最清晰，all组、anll组、非白血病组的 表达率分别是80％、80％、100％，γ亚基表达的病例中灰度扫描结果比值分别为 0.5104±0.1245、0.4997±0.1072、0.9062±0.2013。用all组、anll组灰度扫描结果的 比值分别和非白血病组的比值进行比较，p均0.05，有显著性差异。而且用all组 灰度扫描结果的比值与anll组的比值进行比较，p0.05，差异无统计学意义，见图 3。

3 讨论通过检测il  15水平，结果all组、anll组血清il  15的水平均较非白血病组 和正常对照组低，但all和anll的血清il  15水平差异无统计学意义，说明il  15在 急性白血病患儿中的表达水平要比正常儿童的低。由于il  15具有一定的免疫介 导作用，其水平下降，可能是导致急性白血病患儿免疫功能低下的原因之一，郭 承吉等 [6]发现il  2也存在类似现象。由于il  15和il  2有着广泛的同源性；
是 否急性白血病血清il  15的水平也与病情及预后相关，而通过调节或刺激体内的 细胞因子水平，是否可以达到一定的抗肿瘤作用[7]？因此，对白血病患儿的 il  15水平进行动态观察，可能有助于观察al的病情发展，判断预后及预测复发。

在atl疾病，人类t细胞白血病病毒ⅰ（htlv  ⅰ）感染的细胞其il  15rαmrna 表达显著升高，而且htlv  ⅰtax蛋白的表达可进一步使il  15rαmrna水平升高， 表明il  15rα在atl细胞增殖中有一定的作用[8]。也有发现il  15r高表达的白血病 患儿其预后较好，生存期长，目前机制未明[9]；
本课题用rt  pcr方法从分子水平 上检测骨髓中单个核细胞il  15r亚基mrna的表达，检测显示：all组、anll组、非 白血病组il  15受体α亚基mrna的表达率分别是75％、75％、100％；
β亚基mrna 的表达率分别是80％、85％、100%；
γ亚基mrna的表达率分别是80％、80％、100%， 其中α亚基在bmmc的表达率未见有文献报道；
β亚基表达率较文献[10]报道偏高， 与文献[11]结果相似；
而γ亚基的表达率和文献[11]报道基本一致。而且在all组、 anll组中il  15r三个亚基mrna的表达水平均比非白血病组低，说明急性白血病 il  15 受体三个亚基无论是表达率还是表达水平均要低于非白血病组。

在白血病中,除少数类型白血病细胞外,人们检测到大多数白血病细胞有 fas 的高表达[12] , fas/fasl 系统作为诱导细胞凋亡的一条重要途径,也参与了白 血病的发病过程。并且发现fas的表达与白血病的病情进展、治疗效果及预后密 切相关。已有研究表明il  15不仅能阻止自发的凋亡而且能够阻止fas引起的死亡 信号介导的广泛凋亡[13]；
而且bcl  2 家族通过调节某些细胞中的fas 介导凋亡, 尤其是bcl  2 基因的上调,能对一些肿瘤提供fas 抗性[14] ,对白血病细胞的作用 则是阻止分化细胞凋亡。因此，il  15r在急性白血病的发生发展中是否起到一定 的作用，从而在一定程度上导致al发生的问题值得进一步探讨。