1材料与方法 1.1材料研究对象。灵芝(Ganodermalucidum(Leyss.exFr.)Karst),由四 川省中医药科学院细胞与分子生物学实验室分离保存。
主要试剂。杂木屑、棉籽壳、玉米芯、石膏和石灰粉等,均购自当地农贸 市场;
葡萄糖、蒽酮、浓硫酸、香草醛、齐墩果酸、无水乙醇、NaHCO3、冰醋 酸和氯仿,均为分析纯,市售。
1.2方法主料配方的优化。主料配方优化采用混料设计法,主料由杂木屑、 棉籽壳和玉米芯组成,设定各主料占所有主料的质量百分比为X1’,X2’和X3’, 均满足基本约束条件:0≤X1’≤1;
0≤X2’≤1;
0≤X3’≤1;
X1’+X2’+X3’=1,主料占 配方的90%,则在实际生产过程中主料的添加量为X1=0.9×X1’;
X2=0.9×X2’;
X3=0.9×X3’。辅料占10%,由8%麸皮、1%石膏和1%石灰组成。考虑到各主料培 养基对观测指标存在协同交互作用,试验采用单纯形重心设计,并通过轴点增强 设计选取试验点进行混料设计,共选取10个观察试验点,具体设计见表1。
石灰添加量的优化。基质配方采用15%杂木屑、60%棉籽壳、15%玉米芯、 8%麸皮、1%石膏,装袋前按比例分别添加1%、2%、3%和4%生石灰,以不加石 灰栽培为对照(CK)。
基质颗粒度的优化。基质配方采用15%杂木屑、60%棉籽壳、15%玉米芯、 9%麦麸、石膏1%和1%石灰,以玉米芯和木屑颗粒直径为研究对象,设定处理1为颗粒直径≤0.5cm,处理2为0.5cm≤颗粒直径≤1cm,处理3为颗粒直径≥1cm。
栽培方法。选用22cm×42cm×0.0025cm的聚丙烯袋,每个配方20袋,于121℃ 高压灭菌2.5h,冷却至室温后接种,在25℃、空气相对湿度70%、避光培养至菌 丝长满袋,菌丝满袋后移入出菇棚出芝。出菇棚温度为16~24℃,湿度为65%~ 80%。
指标的检测。(1)灵芝生物转化率。采摘第1潮灵芝子实体,记录每袋收 获干芝重量,计算生物转化率,生物转化率(%)=干芝重量(g)/每袋干重(g) ×100。(2)多糖含量测定[4]。以葡萄糖作为标准,采用硫酸-蒽酮法测定。(3) 三萜含量测定[5]。以齐墩果酸作为标准,采用香草醛-高氯酸法测定。
数据分析。混料设计试验根据结果建立回归方程,求观测指标Y与影响因 子X的数学模型,计算线性回归方程,应用Minitab15软件进行数据处理。
2结果与分析 2.1主料配方的优化采用软件对试验数据进行回归分析,并采用逐步法和 后退法减少不显着变量,对回归方程进行显着性检验(F检验)。当P0.01时,回 归模型在统计学上才有意义。根据上述条件和结果,建立生物转化率Y与主料各 成分X’之间关系的数学模型为:Y=3.69X1’+6.78X2’+4.39X3’,R2=0.7999,说明 试验数据的变异性基本可以用此回归模型来解释。将多糖、三萜与各主料各成分 X’关系的数学模型经过显着性检验可知,P0.01,说明2个模型的拟合度差,不描 述多糖含量和配方之间的关系,但是通过优化结果可知,配方7的多糖含量最高;
配方2的三萜含量最高(表2)。
2.2石灰添加量的优化结果图1表明,随着石灰添加量的增加,袋料栽培灵 芝生物转化率有增加的趋势,在灵芝栽培基质中添加4%生石灰时生物转化率最 高,达到4.3%。当石灰添加量为2%的时候,灵芝三萜含量最高,为0.76mg/g。
当石灰添加量低于或高于2%的时候,三萜含量均略有降低。在添加量为1%~3% 时,灵芝多糖含量随石灰添加量增加而降低;
当石灰添加量为1%的时候多糖含 量最高,为3.24mg/g。
3结论与讨论 研究表明,不同灵芝栽培方式和基质对灵芝品质具有明显影响[6-7]。试验 通过灵芝栽培基质的主料配方、石灰添加量及基质颗粒度的研究,以提升品质为目标对中药材灵芝袋栽培技术进行初探。通过混料试验设计,得到了灵芝代料栽 培主料配方与生物转化率之间回归方程,在灵芝主料配方的通过回归方程的系数 可以看出,影响灵芝生化转化率的因素作用大小为棉籽壳玉米芯杂木屑,该结果 与蒋冬花的研究结果基本相同[8]。通过该方程计算出灵芝生物转化率最高的主 料配方为:90%棉籽壳,预测生物转化率最高为6.78%。虽然试验没有得到主料 配方与灵芝品质(多糖含量和三萜含量)的准确关系,但是发现主料配方对灵芝 品质(多糖含量和三萜含量)具有明显影响。
多数食药用菌对钙具有富集作用[9-11]。高明侠等报道钙离子对灵芝的生 长具有促进作用[12],这与试验结果相似:随着石灰的添加量增加灵芝的生物转 化率提高。在灵芝袋料栽培种添加石灰,除为食用菌的生长补充钙外,主要作用 是调节基质pH值。研究发现,液体发酵灵芝在较低pH值时有利于多糖和三萜的 形成[13-14],这就解释试验中灵芝多糖和三萜在石灰添加量较少时反而更高的现 象。
玉米芯和木屑在基质中除了起到营养物质的作用外,还具有支撑基质的作 用,有利于气体和热量的交换,因此基质的颗粒度越大,越有利于菌丝生长。在 杏鲍菇栽培基质的研究中也发现相似的结果[15],随着大颗粒玉米芯含量的增加, 生物学效率增加。研究发现,液体培养灵芝在较高的摇床转速时,有利于胞外多 糖的形成[16],推测多糖的合成需要充足的氧气,而静置培养更利于三萜的形成 [17],推测三萜合成需要低氧环境,这可以解释为什么袋料栽培灵芝时,多糖含 量随基质颗粒度增加而增加,但三萜含量却降低。
试验结果发现,栽培环节对灵芝品质影响较大,可通过主料配方、石灰添 加量及基质颗粒度可控制袋料灵芝产量和品质。虽然试验结果不是很全面,还有 很多参数尚待研究,但是对建立灵芝GAP袋料栽培技术具有重要的参考价值。
作者:魏巍,余梦瑶,许晓燕,江南 第2篇:中药材栽培技术复杂性的研究 中药材是一种特殊商品,有严格的质量要求。各种药材的产量和质量与当 地的生态条件、栽培技术和产品加工等有很大关系,不是到处都可以种植和随便 加工。要做到优质高产、无污染,并获得较高的经济效益,就要根据各种药材的 生长特性和栽培目的,采用符合其生长特性的科学栽培技术和加工方法。所以要 做好药材生产,一定要注意其特殊性。1中药材种类的多样性 我国幅员辽阔、地形复杂、气候和土壤差异很大,适宜各类植物的生长和 繁殖,因而蕴藏着丰富的中药材资源,大约有10000多种。它们当中有一般很不 起眼的小草,如远志、柴胡,也有高大乔木如银杏、杜仲;
有喜欢生长在南方热 带、亚热带的温湿气候,如槟榔、砂仁,也有喜欢北方的寒冷气候,如龙胆草、 北五味子;
有喜欢阴凉环境,如人参、黄连,也有喜欢生长在水中的,如莲、泽 泻;
有喜欢寄生在其它植物上,如菟丝子、肉苁蓉,也有喜欢和真菌共生的药材, 如天麻等等。
它们的药用部分也有许多不同,有用地下根的如黄芪,当归;
有用地上部 和全草的如芦荟、紫苏;
有用花的如菊花、金银花;
也有用果实和种子的如枸杞 子、决明子;
还有用皮的如黄柏、厚朴等等。由于中药材的种类很多,其中较常 用的约500多种,而需要量较大,主要依靠栽培的约有250多种。所以,供选择的 余地大,可根据各地条件,选择适宜当地生长的中药材栽培生产。
2中药材栽培技术的复杂性 由于中药材种类多,分布广泛,药用部分不同,所以栽培方法也比较复杂 多样。
2.1要求严格的生态环境要求严格生态环境的中药材种类很多,这里列举 几例如下。
2.1.1当归原产高寒阴湿山区,要求冷凉的气候条件。着名当归地道产区, 甘肃岷县在海拔以上的地方种当归,但要在2400~2900m的高山阴坡育苗。这样 种出来的当归产量高、质量好。如在海拔较低的地区育苗、栽种,因气温较高, 生长快,溶易抽苔开花,抽苔后根变木质化,不能药用,所以产量低、质量差, 气味也不浓。如在更低的地区引种,当归因不能忍受夏季高温而死亡。
2.1.2砂仁它喜欢生长在高温高湿的亚热带气候,主产区广东阳春和云南景 洪栽种,年平均气温在22°C左右,极端最低气温不低于1~2°Q在春季开花期如气 温低于20°q花不能开放或开放不正常。
在长江流域一带种植,生长不良,花苔短开花少甚至不能开花,再往北移, 冬季不能安全越冬。2.1.3黄连主产四川、湖北、陕西等省海拔1400山区,凉爽、湿润的气候条 件。黄连原野生于森林下面,因而形成了喜阴湿怕强光的特性,所以人工栽培必 须搭棚或在林下种植。同时也要求富含腐殖质疏松肥沃酸性的砂质壤土。如把黄 连移到低山区种植,因气温高,生长快,叶茂密,但根茎不充实,质量差又易感 病。在北方种植,因空气干燥,土质偏碱,生长不良,又不能安全越冬。在全光 照下栽培更无法生存。
2.1.4甘草产于内蒙古、新疆和宁夏等干旱、半干旱的荒漠、半荒漠地区, 要求土层深厚,排水良好的沙性土,偏碱的钙质土最适宜种植。如在多雨地区或 在粘土地种植,生长不良,主根短、叉根多,容易引起烂根死亡,质量差。
由于这类药材多数长期生长在各种特定的环境中,代代相传,遗传特性各 不相同,所以形成了各自独特的特性,及对当地环境条件的适应性。如高寒山区 的冷凉气侯和林下的阴湿环境,热带、亚热带地区的高温高湿,以及沙漠地区的 干热、严寒气候等。
这些环境条件,往往成为许多地道药材的主产区。
2.2药用部分不同,栽培技术也不一样 2.2.1以根和根茎类入药的药材这类药材选地非常重要,应选土层深厚,土 质疏松、肥沃、排水良好的砂质壤土。还要深耕,施足基肥。追肥时在苗期可适 当追施氮肥,不宜过多,以促进茎叶生长,中后期多施磷钾肥,以促进根茎生长;
不需留种的应及早打苔摘花;
秋季是根或根茎膨大期,要适当浇水和培土;
深根 类药材如黄芪、党参、桔梗等可选坡地种植,以便于采挖。
2.2.2以全草和叶类入药的药材应多施氮肥,适当配施磷钾肥。还要注意适 时采收,一般在蕾期或开花初期采收,这时植株正进入旺盛生长期,质量好,产 量高。如在开花盛期或果期采收,植株内营养物质己大量消耗,产量和质量也随 之下降。有些药材在南方可以1年多次采收。有少数药材如菌陈,必须在幼苗期 采收,如在现蕾前采收,就成为次品。有句读语说:三月茵陈,四月蒿,五月六 月当柴烧。正说明适时采收的重要性。
2.2.3以花类入药的药材要注意适时,采收。以花蕾入药的要掌握好花蕾的 发育程度,及时采收才能保证药效,否则会降低质量,甚至成为废品,如款冬花 应趁花蕾还没有出土时采收,金银花应在花蕾膨大变白时米收;
以花朵入药的一般在花初开时米收,如玫瑰等,当花盛开时采收,花瓣易散落,且色泽、香气不 佳;
以花序、柱头、花粉入药的则宜在花盛时采收,如菊花、西红花、蒲黄等。
以果实、种子类入药的药材除注意増施磷、钾肥外,还要注意适时采收, 有些花期长的药材,其果实成熟期很不一致,应分批采收,如要一次采收,则不 宜太早或过晚,太早采收,多数尚未成熟,会影响产量和质量,一般掌握在 70%~80%成熟时1次采收,如补骨脂、沙苑子等。另外,这类药材有相当一部分 是木本植物,如山茱萸、枸杞子等,所以和果树一样都要进行修枝整形,疏花疏 果等保果措施,才能提高产量和质量。
2.3共生和寄生类药材这类药材比较特殊,如没有与其共生和寄生的伴生 植物,是无法生长的,如天麻必须有蜜环菌与其共生,还要有营养源即菌材,让 天麻、蜜环菌和菌材三者连成一个有机的统一体,天麻才能正常生长发育。所以, 在栽天麻前必须先把蜜环菌培养在菌材上,再伴栽天麻,才能成功。
菟丝子、肉苁蓉等寄生类药材,必须有寄主植物与其伴生。菟丝子以豆科、 菊科或藜科等植物为寄主,肉苁蓉以棱棱植物为寄主,栽培时一定要和这些寄主 植物伴栽在一起才行。
2.4繁殖方法不同种类药材的繁殖方法也各有千秋。一般药材多采用种子 繁殖,也有许多是采用营养器官即无性繁殖。
2.4.1种子繁殖种子寿命有长有短,一般热带药材的种子寿命较短,采种后 应立即播种,否则会丧失发芽力。有的种子寿命可达10a以上,如甘草种子于室 温下贮藏13a还有60%的发芽率。但多数种子在室温下只能保存1a隔年种子就会 丧失发芽力,不能再用。
有的种子还有休眠的特性,如甘草、黄芪种子因种皮坚硬不透水,播种后 不易出苗,需采取一些措施处理才能发芽。一般采用强酸碱处理或砂擦伤种子, 生产上采用碾米机碾撞法,即把种子放进碾米机内转1~2遍即可撞伤种皮,种子 发芽率可达90%以上;
有的种子的胚尚未成熟,如人参、黄连等种子米收后应及 时进行湿砂藏直到秋末、冬初种子裂口再给于冬季的自然低温等后熟处理,到第 2年春才能发芽,否则不能发芽。说明这类种子还有较强的野生性状。
2.4.2无性繁殖中药材大约有35%采用无性繁殖,如采用鳞茎繁殖的有贝母、 百合;
球茎繁殖的有西红花;
根状茎繁殖有款冬、薄荷;
块茎、块根繁殖有半夏、地黄;
分根繁殖有芍药、玄参等。它们的栽种期,一般在休眠期或幼芽开始生长 以前。此外,还可以采用杆插,压条和嫁接等繁殖。
一般无性繁殖比用种子繁殖生长快,产量高,生长年限短,并能保持母本 优良特性,如贝母用种子繁殖需4,5a方可收获,而采用鳞茎繁殖1a即可收获(则 秋种夏收)山茱萸用种子繁殖需10a左右结果,采用嫁接繁殖,一般3~5a可开花 结果,同时果大产量高。
有些药材长期采用无性繁殖容易引起退化,防止退化的方法很多,常用的 方法有:选优去杂;
采用有性繁殖进行品种复壮或杂交育种培育优良品种;
利用 茎尖培养无病毒植株;
异地调种或改变季节培育幼嫩种栽等。要根据引起退化的 原因,采用不同方法。如地黄,古老的栽种方法是在秋季挖收地黄时,把块大的 收作药用,小的(种质较差)才选作种用,加上生长时间长,组织老化,生活力 弱,生长差,就越种越小。后来采用倒栽留种法,即春栽地黄到7月中下旬将块 根挖出重新再栽,到第2年春,栽地黄时再挖出来作种栽用。这种方法培育的种 栽,在地里生长的时间短,组织幼嫩,从遗传学的观点看,是比较年幼的,生活 力强,栽后生长迅速,抗病力强,再结合经常注意选优去杂,就可以有效地防止 退化。
3中药材栽培既要重产量也要重质量 中药材栽培除要求较高的产量外,还要注意药材的质量,一般药材质量可 从两方面来衡量,一方面是药材的外观形态,色泽,质地及气味等传统的鉴别方 法。另一方面是药材内在所含的有效成分,各种药材所含的有效成分各不相同, 比较复杂,一般要通过仪器分析测定。
药材的外观性状和有效成分含量必须符合国家药典规定,才能供药用,所 以在栽培药材时所采取的技术措施都应以提材的产量和质量为目的。只重视产量 不重视质量,产量再高,但有效成分含量很低是没有用的,同时外观性状差,还 会降低药材的商品等级,经济效益也会受到影响。药材有效成分含量的多少和外 观性状优劣,受药材品种、产地、栽培技术、栽培年限,采收期及加工、贮藏等 条件的影响,所以在生产上对每个环节都要严格把好关。
在药材生产比较集中的产区,县有适宜某些药材生长的自然环境,栽培的 历史较长,有较完善、传统的栽培和加工技术也就是独具特色的传统生产习惯, 药材的产量较高,质量也好,被称之为“地道药材”。这种地道药材是经过几百年来,各代名医的临床经验证明有较好疗效,也可以说是药材商品中的各牌产品, 在国内外享有较高声誉,所以在生产上不宜采用远距离,不同气候区域的引种(所 谓的“南药北移、北药南栽加速发展“地道药材”生产,对目前来说是保证药材质 量的有效措施。
4药材 产后加工也是不可忽视的一环药材产后加工也叫产地加工,把收获的新鲜 药材通过不同方法干燥,加工成商品药材。是药材生产的最后一关,关系到药材 产品的质量和产量,如加工得当,不但能提高药材的商品等级,还会多出产量, 相应地提高经济效益。否则会把多年来付出的辛勤劳动和大量投入,由于最后一 关没把好,而损失惨重。
不同药材的加工方法有很大差别,有的很简单只要晒干、阴干或烘干即可, 如多数全草类、种子、果实类药材。有的则很复杂,如一些根和根茎类药材,有 的在干燥前还要洗涤、去皮、整形、蒸煮烫、浸漂、硫磺熏等工序。如附子这味 药毒性较大,需用卤碱浸泡和高温蒸煮等措施来降低毒性。每道工序都要掌握适 度,否则会引起不必要的损失和浪费,甚至影响产品质量。
药材在日晒过程中,要注意经常翻动,防雨淋有的先晒至五六成干时要进 行短期集中堆放,把内部水分扩散出来,使药材回软,俗称“发汗”,再晒至全干。
有些含有挥发油的药材如薄荷、紫苏等,不宜曝晒,宜阴干,或先晒到七 八成干,再放阴棚内阴干,以减少挥发油损失。
在进行人工加温干燥时如炕干或烘干,除注意药材铺放厚度,常翻动外, 还要严格控制火力,一般掌握先大火,后小火,以免炕焦或烧毁药材,或发生火 灾,以前在湖北、四川黄连产区,炕黄连时,由于火力没控制好,烧毁黄连发生 火灾的事,时有发生。所以,最后一关一定要把好,严格遵守操作规程,避免不 应有的损失。确保丰产又丰收。
作者:陈震,万隆,陈君,张丽萍(中国医学科学院中国协和医科大学药 用植物研究所,北京)
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