芦荟 癌症 [中华芦荟抗肿瘤活性成分的研究]

中华芦荟抗肿瘤活性成分的研究

【关键词】 中华芦荟 抗肿瘤 细胞增殖抑制 abstract：objectiveto isolate and purify the active antitumor components from aloe vera var. chinesis berg.methodsusing silica gel column repeatly ,sephadex lh-20,four components were islotated from aloe vera var chinesis berg. by means of physico -chemical properties and spectral analysis, and their structures were determined . the anti-tumor activities of these compounds were evaluated in vitro by srb and flowed cytometry using human leukemia carcinoma cell k252.resultsthese components were identified as aloe - emodin, physcion,chrysophanol, emodin.it showed that 5μg/ml compound 1, 10μg /ml compound 2,3,4 could resisit cancer cell.conclusionall four components can inhibit the growth of the cancer cell. both aloe - emodin and emodin show strong activity , while physcion and chrysophanol show weak activity. key words：
aloe vera var. chinesis berg.;
antitumor;
cell prolifation inhibition 芦荟是百合科芦荟属a loe l.多年生长绿肉质多浆植物，原产于非洲，种 类约有五百多种，我国常见库拉索芦荟、中华芦荟、木立芦荟和开普芦荟，多用 于观赏植物或是美容保健品［1］。WWW.133229.Com文献报道，该属植物具有 广泛的生理活性，如抗癌、抗菌、抗炎、免疫增强等功效［2］。20世纪中期国 外对芦荟的化学成分进行了广泛的研究，已报道蒽醌类、色原酮、生物碱、有机 酸和多糖类等多种生理活性物质。中华芦荟又称斑纹芦荟，国内对其化学成分进 行了一定的研究，如袁阿兴等［3］发现芦荟苦素,但对其抗肿瘤化学成分研究尚 未见报道。本文从中华芦荟中分离得到4个化合物，芦荟大黄素①、大黄素甲醚②，大黄酚③和大黄素④，并以k562肿瘤细胞株，采用流式细胞仪和srb法结合 显微镜检测细胞形态学变化的方法，测定了4个蒽醌类化合物的体外细胞周期抑 制和细胞凋亡诱导活性,首次报道了大黄素甲醚和大黄酚的体外抗肿瘤活性。

1 材料与仪器 x4 型显微熔点仪，温度未校正；
jeol jnm-ecp600型核磁共振波谱仪，tms 为内标。sephadex lh-20、薄层硅胶和层析用硅胶分别为pharmacia公司和青岛海 洋化工厂产品。活性测试采用人慢性髓原白血病肿瘤细胞k562、胎牛血清(fbs)、 rpmi-1640 细胞培养基为hyclone 公司和g ibcobrl 公司产品；
磺酰罗丹明b(srb) 为sigma 公司产品。中华芦荟aloe vera var chinesis berg购自四川绵阳仙游花卉有 限公司，由绵阳师范学院生命科学与技术学院陈桂芳副教授鉴定。

2 方法与结果 2.1 化合物的分离与纯化 2.1.1 提取与分离 中华芦荟叶汁浓缩物（1.5kg）以酸性氯仿7.5l提取 4h，多次提取(10次以上)，浓缩提取液将其溶于乙醇与水的混合液，依次用石油 醚、氯仿、醋酸乙酯分别萃取。氯仿提取物79g，经硅胶柱色谱多次分离（石油 醚-醋酸乙酯梯度洗脱）及sephadex lh-20柱色谱（甲醇洗脱）及多次重结晶分离 纯化得到化合物1（76mg）、化合物2（20 mg）、化合物3（12 mg）和化合物4 （17 mg）。

2.1.2 结构鉴定化合物1:橙黄色针状结晶（乙醇），mp219～220℃。

1h-nmr（dmso，600 mhz）δ：11.97（1h,s）, 11.91（1h,s），7.80（1h,dd），7.72 （1h,dd），7.69（1h,d），7.38（1h,dd），7.30（1h,d），5.62（1h,s），4.63（2h,s）；

13c-nmr（dmso，150 mhz）δ：191.74，181.59，161.72，161.43，153.80，137.42， 133.54，124.49，120.78，119.43，117.18，116.01，114.57，113.22，62.15。与 文献［4］对照确定为芦荟大黄素，其分子式为c15h10o5。

化合物2:橙黄色针状结晶(甲醇)，mp197～198℃。1h-nmr（cdcl3,600 mhz） δ：12.30（1h, s），12.10（1h, s），7.61（1h,s），7.35（1h, d），7.08（1h,d）， 6.68（1h,d），3.94（3h,s），2.46（3h, s）；

13c-nmr（cd3 cl3，150 mhz ）δ：
190.8，181.9，166.5， 165.2，162.5， 148.4，135.2， 133.2，124.5，121.2，113.7，110.2，108.2，106.8，22.1。与文献［5］对照确定为大黄素甲醚，其分子式为c16h12o5。

化合物3：黄色片状结晶（乙醇），mp 196～197℃（乙醇）。1h-nmr （cdcl3，600 mhz）δ：11.97（1h，s），11.87（1h，s），7.80（1h，dd），7.71 （1h，dd），7.55（1h，dd），7.38（1h，dd），7.22（1h，dd），2.44（1h，dd）；

13c-nmr（cdcl3，150 mhz）δ：192.6，182.0，162.7，162.4，149.4，136.9，133.7， 133.4，124.6，124.4，121.4，119.9，115.9，113.8，22.3。与文献［5］对照确定 为大黄酚，其分子式为c15h10o4。

化合物4：黄色针晶，mp 256～258℃（乙醇）。1h-nmr（dmso，600 mhz） δ：12.08（1h，s），12.01（1h，s），11.37（1h，s），7.49（1h，dd），7.16 （1h，dd），7.12（1h，dd），6.59（1h，dd），2.41（1h，dd）；
13c-nmr（dmso， 600 mhz）δ：190.8， 181.2，165.3，165.3，162.3，148.6，134.7，133.3，124.0， 120.5，113.5，108.7，107.9， 108.7，21.0。与文献［5］对照确定为大黄素，其 分子式为c15h10o5。

2.2 化合物的抗肿瘤活性实验 2.2.1 生物活性测试方法采用人慢性髓原白血病肿瘤细胞k562，按照 文献［6，7］采用srb( sulfo rhodamine b, 磺酰罗丹明b) 法, 结合显微镜观察细胞 形态学变化(顺铂做阳性对照)，测定了4个化合物的体外抗肿瘤活性。

2.2.2 抗肿瘤活性结果表明，镜下观察，芦荟大黄素、大黄素有细胞 凋亡诱导活性，其中芦荟大黄素活性较为明显，100 μg/ml时镜下可见较多典型 的凋亡小体，而大黄素则在100 μg/ml时出现凋亡小体，而大黄酚、大黄素甲醚 均无明显的细胞凋亡诱导活性。化合物1在10 μg/ml 时有较强的体外抗肿瘤活性 ［ 抑制率为(57.13±2.13)%］, 化合物4在10 μg /ml时抑制率为(35.17 ± 1.16)%， 化合物2、3的体外抗肿瘤活性较弱，测试浓度为10 μg/ml时抑制率分别为( 18.14 ± 1.15)%，(21.13 ± 3.11)%。

3 讨论 研究表明芦荟中蒽醌类化合物具有抗肿瘤活性，且大黄素、大黄素的抗 肿瘤活性已见报道［8，9］，但是对芦荟中大黄素甲醚、大黄酚抗肿瘤活性尚未 见报道，本文采用k562肿瘤细胞株首次报道了这2个化合物的体外抗肿瘤活性。本文研究表明芦荟大黄素①、大黄素甲醚②、大黄酚③和大黄素④均有细胞增殖 抑制活性，但是其取代基团的位置和性质对化合物抗肿瘤活性的显著影响有待于 进一步研究。

致谢：核磁共振谱和抗肿瘤活性由中国海洋大学食品与海洋药物研究所 代测，特此致谢！